Fachbereich 05 - Medizinische Fakultät
Institut für Strahlenbiologie
Molekulare Strahlenbiologie

Durchflußzytometrische Analyse von PCR-Produkten

Die Untersuchung der Genexpression bei einer Vielzahl von (klinischen) Proben erfordert kostengünstige, automatisierte Methoden mit einer hohen Empfindlichkeit und Zuverlässigkeit. Zu diesem Zweck wurde am Institut für Strahlenbiologie eine Methode zur durchflußzytometrischen Quantifizierung von PCR-Produkten entwickelt. PCR-Produkte werden dazu während der Amplifikation durch die Verwendung entsprechender Primer mit Digoxigenin (DIG) und Biotin markiert. Dies ermöglicht ein anschließendes Abfangen der Amplifikate mit Anti-DIG-Antikörperkonjugierten Mikropartikeln und eine gleichzeitige Anfärbung mit Streptavidin-R-Phycoerythrin. Die Fluoreszenzintensität und damit die Menge an immobilisiertem und gefärbtem Amplifikat wird im Durchflußzytometer bestimmt. Dieses hochempfindliche Verfahren, das bei geringer Meßvariablilität die Detektion von minimal 0,4 fmol PCR-Produkt ermöglicht, wurde eingesetzt, um die Expression von Zytokinen nach Ganzkörperbestrahlung von Leukämiepatienten zu messen.

Drittmittelgeber:

Bundesamt für Strahlenschutz

Beteiligte Wissenschaftler:

Dr. N. Wedemeyer, Dr. T. Pötter, Prof. Dr. W. Göhde

Veröffentlichungen:

Wedemeyer N., T. Pötter: Flow cytometry: an “old“ tool for novel applications in medical genetics. Clin. Genetics 60, 1-8, 2001.

Wedemeyer N., T. Pötter, S. Wetzlich, W. Göhde: Flow cytometric quantification of competitive reverse transcription-PCR products. Clin. Chemistry 48, 1398-1405, 2002.

Göhde W., N. Wedemeyer: Patent: Verfahren zur Bestimmung von PCR-Produkten, sowie von PCR-Detektionskit und eine Vorrichtung für ein solches Verfahren. Internationale Patentanmeldung Nr. PCT/EP00/11222.