Glucocorticoid-induzierte Genprodukte in menschlichen Monozyten: Charakterisierung des RM3/1-Liganden auf Cytokin-stimulierten Endothelzellen

Teilprojektleiter: Prof. Dr. C. Sorg
Fachgebiet: Zellbiologie

Im ersten Antragszeitraum wurde die differentielle Genexpression humaner Monozyten nach Glucocorticoid (GC)-Stimulation mittels des "Differential Displays" (DDRT-PCR) analysiert. Dabei wurde das GC-induzierte RM3/1-Gen identifiziert. Mit Hilfe des monoklonalen Antikörpers (RM3/1) konnte bereits zuvor eine GC-induzierbare Monozytensubpopulation identifiziert werden, die in der Spätphase einer Entzündung ins Gewebe auswandert und dort möglicherweise antiinflammatorisch wirkt. Diese Population adhäriert nicht über die bekannten Adhäsionssysteme an das Gefäßendothel, sondern RM3/1 und CD14 sind für die Adhäsion an Cytokinstimuliertes Endothel verantwortlich. Wir haben damit ein neues, Monozyten-spezifisches Adhäsionssystem identifiziert. Im vorliegenden Antrag wird das Ziel definiert, den RM3/1-Liganden auf Endothelzellen molekular zu charakterisieren. Nach Optimierung der Induktion des Liganden wird eine cDNA-Bank von entsprechend induzierten EA.hy926-Endothelzellen hergestellt und zur Transfektion von COS-7 bzw. CHO-Zellen eingesetzt. Mittels einer Affinitätssonde, die ein chimäres Fusionsprotein aus den extrazellulären RM3/1-Domänen und dem humanen Fc-Anteil von IgG1 darstellt, sollen Transfektanten selektioniert werden. Nach erfolgreicher Klonierung der den RM3/1-Liganden codierenden cDNA und Reinigung des Proteins sollen monoklonale Antikörper hergestellt und damit die Rolle dieses Adhäsionssystems bei akuten und chronischen Entzündungen definiert werden.

Beteiligter Wissenschaftler:

Prof. Dr. C. Sorg (Teilprojektleiter)

Veröffentlichungen:

Dreier, J., P. Högger, C. Sorg: Rapid method for isolation of total RNA from eukaryotic cell lines and leukocytes. DNA + Cell Biol 17: 321-323 (1998).

Högger, P., U. Erpenstein, P. Rohdewald, C. Sorg: Biochemical characterization of an glucocorticoid-induced membrane protein (RM3/1) in human monocytes and its application as model system for ranking glucocorticoid potency. Pharm Res 15: 295-302 (1998).

Högger, P., J. Dreier, A. Droste, F. Buck, C. Sorg: Identification of the integral membrane protein RM3/1 on human monocytes as a glucocorticoid-inducible member of the scavenger receptor cysteine-rich family (CD 163). J Immunol 161: 1883-1890 (1998).