Empfindlickeitsbestimmung von Hefen gegenüber Antimykotika
- Standardisierung und Resistenzepidemiologie

1. Standardisierung der Empfindlichkeitsbestimmung von Hefen. "Multizenterstudie zur Standardisierung der Empfindlichkeitsbestimmung bei Hefen der Arbeitsgemeinschaft "Klinische Mykologie" der Deutschsprachigen Mykologischen Gesellschaft (DmykG) - RV2-Studie"

   Die für die Testung von Antimykotika gegenüber Hefen bestehende amerikanische Norm NCCLS M27-A wirft insbesondere durch das verwendete Nährmedium (RPMI) bei der Testung für eine Reihe klinisch relevanter Hefen Standardisierungsprobleme auf. Aus diesem Grunde wurden drei weitere etablierte Nährmedien für die Empfindlichkeitsbestimmung von Hefen mit und ohne Methylenblauzusatz im Vergleich zu RPMI in Korrelation zu 25 internationalen Referenzstämmen und klinischen Hefeisolaten in 15 mykologischen Zentren in Deutschland, Österreich und der Schweiz mittels vergleichende Bestimmung der Minimalen Hemmkonzentration untersucht. Die wissenschaftliche Studienkoordinierung erfolgte von Münster (W.Fegeler) und Illertissen/München (A.F. Schmalreck) aus. Ergebnisse dieser Studie bilden u.a. mit die Grundlage des DIN-Entwurfes 58940.

2. Resistenzepidemiologie von Hefen

   System- und Organmykosen durch Hefen sind bei prädisponierten Patienten mit einer zusätzlichen Letalität von ca. 38% belastet. Da nicht selten die Erreger beim Patienten in Überwachungsuntersuchen schon nachgewiesen werden können, erlangt die Kenntnis über die Verteilung der Hefearten sowie ihre Empfindlichkeit gegenüber Antimykotika im klinischen Untersuchungsmaterial eine besondere Bedeutung für die frühe antimykotische Interventionstherapie. In einer inneruniversitären Studie mittels eines Breakpoint-Testes an 2060 konsekutiven Hefeisolaten der klinischen Routinediagnostik des Institutes zeigte sich u.a., daß nicht nur die Verteilung der Hefearten, sondern auch ihre Empfindlichkeiten gegenüber Flucytosin und Fluconazol in Abhängigkeit vom Patientenkollektiv variierten.

   Die standardisierte Empfindlichkeit-Testung von Hefen ermöglicht durch Korrelation mit der Genotypisierung (AP-PCR) und moderner Phänotypisierung (Fourier-Transformations-Infrarot-Spektroskopie) neue resistenzepidemiologische Ansätze bei C. glabrata und anderen emerging yeasts".

3. Multinationale Breakpoint-Studie zur Verteilung von Hefearten und ihren Empfindlichkeiten gegenüber systemisch einsetzbaren Antimykotika

   Im Rahm einer von Münster koordierten multinationalen Breakpoint-Studie wurden Verteilungen der Hefearten und ihrer Empfindlichkeiten gegenüber systemisch einsetzbaren Antimykotika in klinisch relevanten Untersuchungsmaterialien in verschiedenen Ländern analysiert. Mittels eines standardisierten Breakpoint-Tests, eines Mikrodilutionstests in RPMI1640 mit 2% Glucose mit je 3 Antimykotika-Grenzkonzentrationen wurden alle Hefestämme (N = 1268 Stämme) aus klinischen Routine-Untersuchungmaterialien innerhalb eines Zeitraumes von 14 Tagen aus 10 mykologisch-diagnostischen Laboratorien und 2 Referenzlaboren auf ihre Empfindlichkeit gegenüber den systemisch einsetzbaren Antimykotika 5-Flucytosin, Fluconazol sowie Voriconazol untersucht und u.a. dem klinischen Bezug der Untersuchung (Diagnostik, Überwachung sowie ambulanter oder klinischer Patient) zugeordnet. Wider Erwarten zeigte sich, daß jedes Zentrum sein eigenes Hefespektrum und in diesem wiederum eine unterschiedliche Verteilung resistenter Stämme besitzt.

Beteiligte Wissenschaftler:

PD Dr. med. Wolfgang Fegeler, Dr. med. Karsten Becker, Dr. med. Frank K.-F. Scherff, Steffen Schierbrock

Veröffentlichungen:

Schmalreck, A.F., Fegeler,W.: Preliminary internal quality control ranges for antifungal agents tested by microdilution according to DIN 58940 against yeasts. 1999. Mycoses 42,158-159

Schmalreck,A.F., Fegeler,W.: Standardization of yeast susceptibility testing: multicentre MIC study to determine culture medium performance. 1999. Mycoses 42,207-208

Fegeler, W., Schmalreck, A.F. and Members of the Working Group "Clinical Mycology" of German Speaking Mycological Society - DmykG: Influence of media on the susceptibility of Candida species to fluconazole tested in a micro dilution assay according to DIN 58940. 2000. Rev Ibroam Micol 17, 160

Becker, K., Scherff, F., Fegeler, W.: Susceptibility of 2016 yeast isolates of the clinical routine diagnostic towards flucytosine (5-FC) using a breakpoint test. ICAAC 1999, San Francisco, California USA, September 26-29,1999. Poster 1515, page 486

Fegeler, W., Bille, J., Dupont, B., Edebo, L.B., Ellis, D.H., Kappe, R., Makristathis, A., Meis, J. F.G.M., Mittermayer, H., Ritzler, M., Schär, G., Schmalreck, A.F., Viviani, M.A., Willinger, B.: Distribution of yeast species in clinical routine diagnostic specimen and their susceptibility against fluconazole, voriconazole and flucytosine. 1999. Mycoses 42,174-175

Fegeler, W., Bille, J., Dupont, B., Edebo, L.B., Ellis, D.H., Kappe, R., Makristathis, A., Meis, J. F.G.M., Mittermayer, H., Ritzler, M., Schär, Gertrud , Schmalreck ,A.F., Viviani, Maria A., Willinger, Birgit: Susceptibility of clinical yeast isolates to fluconazole (FCA) and 5-flucytosine of a multinational study. 2000. Clin. Microbiol. Infect. 6, Sup.1, 97-97

Fegeler, W., Schmalreck, A., Becker, K.: Susceptibility of Candida glabrata to fluconazole and the correlations to different phenotypes and genotypes. Rev Ibroam Micol 17, 164.