Charakterisierung der Genprodukte der Leserahmen U21, U22 und U23
des humanen Herpesvirus 6

Die Genomregion, die die vorhergesagten Leserahmen U23, U22 und U21 des humanen Herpesvirus 6 umfaßt, wurde mit konventioneller RT-PCR, 5'-RACE-PCR, und in-vitro-Expression der einzelnen Leserahmen untersucht. Nur U23 konnte erfolgreich in eukaryoten Systemen exprimiert werden und ergab ein ca. 45kD großes Protein, das an mindestens 2 Stellen eine N-Glykosylierung aufwies. Expression dieses Proteins als c-terminales EGFP-Konstrukt in Hela-Zellen ergab eine eindeutige Lokalisation an der Plasmamembran und zeigte somit, dass dieses Protein alle vorhergesagten Eigenschaften als Typ I-Glykoprotein aufwies. RT-PCR-Experimente ergaben keinen Hinweis auf Splicing-Ereignisse über den gesamten untersuchten Bereich des Genoms; vielmehr konnte gezeigt werden, dass es eine beachtliche Menge an mRNA gibt, die vom 5'-Drittel von U24 bis zum 5'-Drittel von U21 (ca. 2,8 kb) und vom 3'-Drittel bis zum 5'-Ende (ca. 3,7 kb) von U20 reicht. Mittels 5' RACE-PCR ab dem 3'-Drittel von U22 konnten wir 3 mRNA- Familien nachweisen, deren 5'-Enden i) zwischen U24 und U25, ii) in der intergenischen Region zwischen U24 und U23, iii) sowie 163 bp abwärts des Startcodons von U23 lagen. Diese Ergebnisse und weitere Expressionsversuche mit von den o.g. mRNAs abgeleiteten cDNAs unterstützen die Hypothese, dass U23 der einzige Kandidat mit für ein funktionelles Protein ausreichender Kodierungskapazität, und U22 wahrscheinlich kein eigenes Gen ist.

Drittmittelgeber:

IMF EI 12 98 39

Beteiligte Wissenschaftler:

Dr. med. Bodo R. Eing, Dipl. Biol. Wali Hafezi, Dr. rer. nat. Eva U. Lorentzen, Prof. Dr. med. Joachim E. Kühn

Veröffentlichungen:

Eing, B.R, Oelert T., und Kühn J.E.: Expression, Charakterisierung und serologische Reaktivität von rekombinantem HHV-6 U23 Glykoprotein. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Virologie (GfV), 9.-12. März 1999, Bremen, 1999.